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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/40113
APLICABILIDADE DE ANTICORPOS MONOCLONAIS E SOROS HIPERIUMUNES, NA TÉCNICA DE IMUNO-HISTOQUÍMICA, PARA O DIAGNÓSTICO DA LEISHMANIOSE TEGUMENTAR
Diagnóstico laboratorial
Técnica de imuno-histoquímica
Anticorpo monoclonal
Soro hiperimune
Leishmaniose Mucocutânea/diagnóstico
Técnicas Imunomarcadoras
Monoclonal antibody
Hyperimmune serum
Saliba, Juliana Wilke | Date Issued:
2019
Author
Advisor
Comittee Member
Affilliation
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil.
Abstract in Portuguese
Existem diferentes métodos descritos para o diagnóstico laboratorial da leishmaniose tegumentar (LT). A imuno-histoquímica (IHQ) é considerada uma técnica alternativa e complementar do exame histopatológico para o diagnóstico da doença. Entretanto, as evidências sobre a aplicabilidade, reprodutibilidade e o desempenho de anticorpos monoclonais e soros hiperimunes disponíveis para a técnica de IHQ são relativamente escassas. Por isso, foram selecionados, a partir de uma pesquisa de anticorpos comerciais ou registrados em base de dados, dois anticorpos monoclonais (AcMo), um anti-Leishmania A2 (AcMo-A2) e outro anti-Leishmania GP63 (AcMo-GP63), e incluídos dois soros hiperimunes, um produzido contra a proteína recombinante KMP-11 de L. braziliensis (SH-KMP-11) e outro obtido de um “pool” de soros de cães diagnosticados com leishmaniose visceral (SH), para a realização deste trabalho. A padronização da técnica de IHQ foi realizada em amostras de lesões de pele de hamsters infectados experimentalmente com L. braziliensis, L. amazonensis e L. guyanensis. O desempenho da técnica de IHQ, usando anticorpos monoclonais e soros hiperimunes foi avaliado em 72 amostras de lesões de pacientes com suspeita clínica de LT, atendidos no Centro de Referência em Leishmanioses do Instituto René Rachou/FIOCRUZ. Os resultados foram interpretados por três observadores independentes, de acordo com os critérios “Topografia”, “Localização” e “Forma”. A maior sensibilidade e área sob a curva (AUC) da técnica de IHQ foram de 66,1% e 0,761 com o uso do SH para diagnóstico da LT. Ao comparar os resultados da IHQ com outros exames de referência, foi observado que a IHQ e o exame direto (imprint) apresentaram uma proporção de 73,4% de casos corretos e a IHQ e a PCR convencional uma proporção de 70,8% de casos corretos. A concordância entre os observadores variou conforme o critério de análise morfológica e o propósito da interpretação da IHQ. Adicionalmente, os resultados da técnica de IHQ foram muito influenciados pelo tempo de evolução da lesão. A positividade da IHQ nas lesões recentes, com tempo menor ou igual a 75 dias, foi quatro vezes maior (Odds ratio = 4,04) que nas lesões antigas. Os resultados obtidos nesse estudo confirmam que a técnica de IHQ, usando soro hiperimune de cão, constitui uma importante ferramenta no diagnóstico laboratorial da LT.
Abstract
Different methods are described for the laboratory diagnosis of tegumentary leishmaniasis (TL). Immunohistochemistry (IHC) is considered an alternative and complementary technique of histopathological examination for the diagnosis of TL. However, evidences on the applicability, reproducibility and performance of available monoclonal antibodies and hyperimmune sera are relatively scarces. Therefore, two monoclonal antibodies (mAb), one anti-Leishmania A2 (AcMo-A2) and one anti-Leishmania GP63 (mAb-GP63) were selected from a commercial antibody database, and included two hyperimmune sera, one produced against L. braziliensis recombinant protein KMP-11 (HS KMP-11) and the other obtained from a pool of sera from dogs diagnosed with visceral leishmaniasis (SH) for the accomplishment of this work at the Reference Center on Leishmaniasis of the René Rachou / FIOCRUZ Institute. The standardization of the IHC technique was performed on samples of skin lesions of hamsters experimentally infected with L. braziliensis L. amazonensis and L. guyanensis. The performance of the IHC, using mAb or HS was evaluated in72 lesion samples from patients with clinical suspicion of TL and interpreted by three independent observers according to the “Topography”, “Location” and “Shape” criteria. The highest sensitivity and area under the curve (AUC) of the IHC technique were 66.1% and 0.761, respectively, with HS. When comparing the results of the IHC with other reference exams, it was observed that the IHC and the direct examination (imprint) had a proportion of 73.4% of correct cases and the IHC and the conventional PCR had a proportion of 70.8% of correct cases. The agreement between the observers varied according to the criterion of morphological analysis and the purpose of the interpretation of the IHC. In addition, the results of the IHC technique were strongly influenced by the time evolution of the lesion. The IHC positivity in the recent lesions, with time less than or equal to 75 days, was four times greater (Odds ratio = 4.04) than in the old lesions. The results obtained in this study confirm that the IHC technique, using hyperimmune dog sera, is an important tool in laboratory diagnosis of LT.
Keywords in Portuguese
Leishmaniose tegumentarDiagnóstico laboratorial
Técnica de imuno-histoquímica
Anticorpo monoclonal
Soro hiperimune
DeCS
Diagnóstico Laboratorial/métodosLeishmaniose Mucocutânea/diagnóstico
Técnicas Imunomarcadoras
Monoclonal antibody
Hyperimmune serum
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