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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/37944
DESENVOLVIMENTO E VALIDAÇÃO DE MÉTODO NÃO DESTRUTIVO DE DETERMINAÇÃO DE NITROGÊNIO PROTEICO EM VACINA DE FEBRE AMARELA POR ESPECTROSCOPIA DE INFRAVERMELHO PRÓXIMO COM CALIBRAÇÃO MULTIVARIADA
Infravermelho próximo
Quimiometria
Validação do método
Controle de Qualidade
Calibração multivariada
Near infrared
Chemometrics
Validation method
Quality control
Multivariate calibration
Emídio dabkiewicz, Vanessa | Date Issued:
2016
Author
Comittee Member
Affilliation
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Abstract in Portuguese
A vacina febre amarela (atenuada) é o meio mais eficaz para prevenir e controlar essa doença. E segundo registros recentes, preocupa sua possível reemergência, refletindo no aumento da solicitação da vacina, tanto pelo Ministério da Saúde para áreas nacionais, quanto para a exportação.O conteúdo de proteína total é um fator de influência na tolerância a este imunobiológico, devendo ser monitorado o limite máximo exigido pela legislação, por meio do teste de nitrogênio proteico; realizado através do método de Kjeldahl, cujas desvantagens incluem o uso de reagentes químicos, a geração de resíduos e um longo tempo de análise. Diante da importância atribuída ao teste de nitrogênio proteico, no controle do produto final da vacina, é clara a motivação para o desenvolvimento e validação deste trabalho. Dentro das diretrizes da boa prática de fabricação (BPF) e fundamentos de vigilância sanitária, foi contemplada a espectroscopia do infravermelho próximo (NIR) com reflectância difusa, associada à calibração multivariada, como uma alternativa para o método clássico. A calibração multivariada mais apropriada foi alcançada para o método mínimos quadrados parciais (PLS) com tratamento de correção multiplicativa de sinal (MSC) e dados centrados na média (CM), utilizando um número mínimo de variáveis latentes igual a 1, com menor valor da raiz quadrada do erro médio quadrático de previsão (0,00334) associado ao maior valor de percentual (90%) de amostras com exatidão na faixa de recuperação de 95 a 105%, na região de 4000-5184 cm-1. O modelo teve comportamento nas suas previsões, considerado repetitivo com um valor de HorRat menor que 2, e com desvio padrão relativo menor que 5%. Os critérios de aceitação foram satisfatórios, indicando precisão intermediária adequada. O método não foi considerado robusto para a temperatura de 27°C, mas robusto para as temperaturas avaliadas (22°, 24° e 25°C), para todos os tempos de degelo avaliados (10 minutos a 6 horas), para a troca da lâmpada do instrumento e para a variação da posição de leitura do frasco da amostra. A recuperação para valores de incremento de 0,02 mg/dose em nitrogênio proteico, com adição do padrão de ovoalbumina às amostras, apresentou percentuais entre 95 a 105%. A incerteza dos resultados da metodologia analítica do Kjeldahl (0,002345 mg/dose), representou uma contribuição significativa de 54% no resultado da incerteza dos resultados da calibração multivariada (0,002867mg/dose). Essa avaliação reflete a forte influência da confiabilidade dos valores de referência. A espectroscopia NIR apresentou vantagens sobre o método Kjeldahl, pois permitiu a eliminação do uso de reagentes perigosos, a redução do tempo total de análise e eliminou a geração de resíduos. A análise pela técnica espectroscópica, por ser não destrutiva, possibilita o reuso das amostras para estudo de estabilidade da vacina. Finalmente, este trabalho apresentou a implementação e validação de modelos multivariados, através de uma robusta técnica de espectroscopia de infravermelho próximo, para determinação de nitrogênio proteico. Mostrando-se uma alternativa viável ao método tradicional e uma possível ferramenta orientativa, para estudos posteriores na área de controle de qualidade, voltadas às exigências da vigilância sanitária.
Abstract
The yellow fever vaccine (attenuated) is the most effective way to prevent and control the disease. And according to recent records, concerns its possible reemergence, reflecting the increased request by both the Ministry of Health to national areas , and for export. The total protein content is a factor influencing the tolerance to this immunobiological and should be monitored the limit required by law, through the protein nitrogen test; performed by the Kjeldahl method, which disadvantages include the use of chemical reagents, waste generation and a long analysis time. Given the importance attached to the protein nitrogen test in control of the final product of the vaccine is a clear motivation for the development and validation of this work. Within the guidelines of good manufacturing practice (GMP) and health surveillance foundations, was awarded the near infrared spectroscopy with diffuse reflectance, connected with multivariate calibration as an alternative to the traditional method. The most appropriate multivariate calibration has been achieved for the PLS method and MSC, CM treatment, using a minimum number of latent variables equal to 1, less RMSEP value (0.00330) associated with the highest percentage value (91%) samples exactly a 95 to 105%, recovery band in the region of 4000-5184 cm-1. The model had behavior in their forecasts, considered repetitive with less Horrat value than 2, and relative standard deviation less than 5%. The acceptance criteria were satisfactory, indicating adequate intermediate precision. The method is not considered to be robust to 27° C, but robust to measured temperatures (22°, 24° and 25° C) for all time evaluated thaw (10 minutes to 6 hours) for the exchange instrument lamp and the variation of the sample vial reading position. The recovery increased to values of 0.02 mg/dose in protein nitrogen, with standard addition of the ovalbumin samples showed percentages between 95 and 105%. The uncertainty of the result of the Kjeldahl analytic methodology (0,002345 mg/dose), was a significant contribution of 54% in the uncertainty of the result of multivariate calibration (0,002867 mg/dose). This assessment reflects the strong influence of the reliability of the reference values. NIR spectroscopy showed advantages over the Kjeldahl method, because it allowed the elimination of the use of hazardous reagents, the reduction in the total analysis time and eliminated the generation of residues (leavings). The analysis by spectroscopic technique by been non-destructive, enables the reuse of samples for study of vaccine stability. Finally, this work presented the implementation and validation of multivariate models, through a robust technique of near infrared spectroscopy for the determination of protein nitrogen, proving a viable alternative to the traditional method and a possible tool for guidance for further studies in the quality control area, geared to the demands of health surveillance.
Keywords in Portuguese
Determinação de nitrogênioInfravermelho próximo
Quimiometria
Validação do método
Controle de Qualidade
Calibração multivariada
Keywords
Nitrogen determinationNear infrared
Chemometrics
Validation method
Quality control
Multivariate calibration
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