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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/36223
ANÁLISE PALEOGENÉTICA DE TREPONEMAS EM REMANESCENTES HUMANOS DO PERÍODO HISTÓRICO BRASILEIRO (SÉCULOS XVII AO XIX)
Paleogenética
DNA Antigo
Sífilis
Treponema pallidum
Hibridização
Silva, Lucélia Guedes Ribeiro da | Date Issued:
2014
Alternative title
Paleogenética analysis of treponemes in human remains doperíodo Brazilian history (seventeenth to nineteenth centuries)Advisor
Affilliation
Fundação Oswaldo Cruz. Escola Nacional de Saúde Pública Sergio Arouca. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Abstract in Portuguese
Objetivos: Verificar a presença de treponematoses através da análise
paleogenética em remanescentes humanos dos séculos XVII ao XIX da cidade do
Rio de Janeiro. Avaliar o diagnóstico molecular de Treponema pallidum em soros
de indivíduos positivos para sífilis, assim como determinar o perfil parasitológico
destes pacientes. Metodologia: A análise paleogenética de Treponemas foi
aplicada em 48 indivíduos provenientes dos sítios arqueológicos Igreja Nossa
Senhora do Carmo (INSC) e Cemitério da Praça XV (CPXV), datados dos séculos
XVII ao XIX. Material ósseo, constituído principalmente de fragmentos de crânio, foi
selecionado para a análise paleogenética que seguiu estritamente os
procedimentos de estudos de aDNA. Foi realizada extração de aDNA seguida de
hibridização de aDNA em membrana de nylon pelo método de Dot Blot, incluindo
controles negativos (DNA humano) e positivos (DNA de cepas referências de T.
pallidum, Nichols (T. p. ssp. pallidum) e CDC2 (T. p. ssp. pertenue). Aplicou-se a
técnica molecular para detectar a presença de Treponemas com 3 alvos
moleculares para T. pallidum, 47KDa, DNA Pol A e 15KDa. A eficiência de detecção
molecular de T. pallidum foi previamente avaliada pela técnica de PCR em cepas
referências Nichols e CDC2, e em 18 amostras de soro de pacientes com sífilis
atendidos em Unidades de Saúde do Rio de Janeiro. O diagnóstico molecular de
treponematoses em soros foi avaliado pela técnica de PCR e adicionalmente,
registros de pacientes com sífilis foram analisados para avaliar o perfil
parasitológico dos mesmos. Resultados: Na análise paleogenética, foi detectada a
infecção por Treponema sp. em 7/22 (31,8%) dos indivíduos do sítio arqueológico
INSC, 4 (18%), 5 (22,7%) e 12 (54,5%) para os alvos 47KDa, DNA Pol A e 15KDa,
respectivamente. No sítio arqueológico CPXV, a positividade para Treponema foi
observada em 8/26 (30,7%) indivíduos, 8 (30,7%), 3 (11,5%) e 2 (7%) para os alvos
47KDa, DNA Pol A e 15 KDa, respectivamente. Todos os controles de hibridização,
negativos e positivos, demostraram os resultados esperados. A avaliação da
detecção molecular em soros de pacientes com sífilis revelou positividade em 12/18
(66,6%), com 8 (44,4%), 5 (27,7%) e 4 (22,2%) indivíduos positivos para os alvos
47KDa, DNA Pol A e 15KDa, respectivamente. A análise do perfil parasitológico de
indivíduos com sífilis não pode ser conduzida pela ausência ou escassez de
solicitações para os soropositivos. Em pacientes atendidos no Hospital Universitário
Pedro Ernesto, 6/62 (9,6%) exibiram pedidos de pesquisa parasitológica no período
de 2008-2013, e 3 (50%), 2 (33,3%) e 1 (16,6%) foram positivos para Giardia
lamblia, Strongyloides stercoralis e Ascaris lumbricoides, respectivamente. No
Centro de Saúde Escola Germano Sinval Faria apenas 1/50 (2%) apresentou
pedido para exame parasitológico, sendo positivo para Iodamoeba bustchilli.
Conclusões: A infecção por T. pallidum foi detectada em indivíduos do período
histórico da cidade do Rio de Janeiro. A prevalência da infecção por T. pallidum foi
similar em ambos os sítios arqueológicos independentemente das diferentes etnias
e níveis socioeconômicos distintos característicos das populações enterradas nos
dois sítios do estudo. A técnica de hibridização de aDNA com os 3 alvos
moleculares mostrou ser eficiente na detecção de treponematose em material
ósseo. Os alvos moleculares aplicados são sensíveis para detectar DNA de T.
pallidum em pacientes com titulação sorológica até 1:8 e em soros fracamente
reatores. A frequência de pedido de pesquisa parasitológica varia de 2 a 10%.
Abstract
Objectives: To check the presence of Treponematosis in human remains of
centuries XVII to XIX from the Rio de Janeiro city. To determine the parasitological
profile of individuals with syphilis, and to evaluate the molecular diagnosis of T.
pallidum in serum. Methodology: The paleogenetic analysis of Treponemas was
applied in 48 samples of the Nossa Senhora do Carmo Church (INSC) and Cemitery
Praça XV (CPXV) archaeological sites, dating of the XVII to XIX centuries, in order
to detect the presence of Treponematosis. Was performed aDNA extraction followed
of aDNA hybridization in nylon membrane by Dot Blot method., including negative
(Human DNA) and positive (T. pallidum DNA of references strains, Nichols (T. p.
ssp. pallidum) and CDC2 (T. p. ssp. pertenue) controls. The molecular technique
was applied to detect the presence of Treponemas using 3 molecular targets for T.
pallidum, 47KDa, DNA Pol A e 15KDa. The efficiency of molecular detection of T.
pallidum was previously assessed by PCR in the references strains, Nichols and
CDC2, and in 18 serum samples from patients with syphilis from Units of Health in
Rio de Janeiro. The molecular diagnosis of treponematosis in serum was evaluated
by PCR technique and additionally, medical records of patients with syphilis were
analyzed to assess their parasitological profile. Results: In paleogenetic analysis,
we detected the infection by Treponema sp. on 7/22 (31.8%) of individuals from
INSC archaeological site, 4 (18%), 5 (22.7%) and 12 (54.5%) for targets 47KDa,
DNA Pol A and 15KDa, respectively. The archaeological site CPXV the positivity
treponematosis was observed in 8/26 (30.7%) individuals, 8(30.7%), 3 (11.5%) and
2 (7%) for the targets 47KDa, DNA Pol A and 15 KDa, respectively. All the
hybridization controls, negative and positives, demonstrated the expected results.
Regarding the evaluation of the molecular detection in sera from patients with
syphilis, 12/18 (66.6%) were positive, with 8 (44.4%), 5 (27.7%) and 4 (22.2%)
individuals positive for 47KDa, DNA Pol A and 15KDa targets, respectively. The
PCR technique was effective for detection of T. pallium in serum, even in samples
reactors weakly in serology. The analysis of the parasitological profile of individuals
with syphilis could not be conducted by the absence or insufficiency of medical
requests for parasitological test. In patients from the Pedro Ernesto Hospital, 6/62
(9.6%) had request for parasitological test in the period from 2008-2013, with 3
(31.2%), 2 (20.8%) and 1 (10.4%) positive for Giardia lamblia, Strongyloides
stercoralis and Ascaris lumbricoides, respectively. At the Center for School Health
Germano Sinval Faria, only 1/50 (2%) filed a request for parasitological examination,
being positive for Iodamoeba bustchilli. Conclusions: Infection by T. pallidum was
detected in individuals of the historical period from the Rio de Janeiro city. The
prevalence of infection by T. pallidum was similar in both archaeological sites,
regardless of different ethnicities and socioeconomic levels, which were
characteristic of the populations buried in the two sites of study. The technique of
aDNA hybridization with 3 molecular targets proved to be efficient in detecting
treponematose in bone material. The molecular targets applied are sensitive to
detected DNA of T. pallidum in patients with serological titer under 1:8 and in
reactors weakly serum. The frequency of request for parasitological examination
ranges from 2 to 10%.
Keywords in Portuguese
TreponematosePaleogenética
DNA Antigo
Sífilis
Treponema pallidum
Hibridização
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