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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/20781
MONITORAMENTO DA SUSCETIBILIDADE AO PIRETRÓIDE DELTAMETRINA EM POPULAÇÕES DE TRIATOMA SORDIDA STÅL, 1859 (HEMIPTERA: REDUVIIDAE)
Deltametrina
mtCytB
Variabilidade genética
Triatomíneos
Triatoma sordida
Pessoa, Grasielle Caldas D'Ávila | Date Issued:
2008
Advisor
Comittee Member
Affilliation
Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil.
Abstract in Portuguese
A resistência de triatomíneos a inseticidas já foi relatada na Venezuela, Argentina e Bolívia, sendo possível a existência de outros focos em regiões ainda mais amplas. Deste modo, torna-se necessário desenvolver estudos que investiguem a dispersão geográfica desses vetores resistentes, bem como os mecanismos envolvidos, com vistas a elaborar estratégias adequadas às necessidades locais, ou até mesmo que impeçam o aparecimento deste fenômeno. O objetivo deste estudo foi padronizar ensaios biológicos para monitoramento de resistência de triatomíneos a inseticidas em laboratório e caracterizar a suscetibilidade de quatorze populações de Triatoma sordida Stal, 1859 de Minas Gerais (Sudeste do Brasil) ao piretróide Deltametrina. A área em que os triatomíneos foram coletados foi submetida ao controle químico por cerca de 30 anos. A linhagem referência de suscetibilidade é oriunda de Uberaba. A metodologia foi orientada pelas recomendações da WHO (1994) e OPS (2005), tendo sido redefinidos alguns detalhes técnicos (dose diagnóstica adequada para triagem de resistência em triatomíneos, local ideal de aplicação do inseticida nas ninfas I, idade e geração dos insetos utilizados). A linha base d e suscetibilidade da linhagem referência foi inicialmente determinada. A Deltametrina, solubilizada em acetona, foi aplicada topicamente no dorso do abdômen de ninfas I da geração F 2 (cinco dias de idade, jejum, ± 1,2 mg. de peso) com auxílio de uma microseringa. Os resultados dos ensaios dose-resposta foram analisados com auxílio do programa PROBIT (Finney, 1971). Em seguida, as populações de campo foram submetidas a dose diagnóstica de 1XDL99 da linhagem referência de suscetibilidade e 2XDD99 da linhagem referência de suscetibilidade. Todas as populações apresentaram-se menos suscetíveis ao inseticida quando comparadas com a linhagem referência de suscetibilidade. As razões de resistência encontradas variaram de 2,6 a 6,8. A comparação de um fragmento de DNA de 317 pb do gene mitocondrial do citocromo b (mtCytB) foi usada para inferir sobre a variabilidade genética das quatorze populações de T. sordida estudadas. Inferências filogenéticas, usando P. megistus como grupo externo, não revelaram a formação de clados. O s 150 espécimes analisados apresentaram 50 haplótipos gerando uma divers idade (Hd) de 0,831. Foi possível distinguir seis populações geneticamente diferentes. Análise do Network revelou a presença de vários loops, demonstrando homoplasia e a ocorrência de mutações reversas/paralelas. Com o marcador genético utilizado não foi possível estabelecer correlação entre a variabilidade genética das populações estudadas e a resistência a Deltametrina. Giordano et al. (2005) sugerem que os microssatélites podem ser uma ferramenta mais sensível e eficiente para este objetivo. A possível natureza bioquímica da resistência encontrada está sendo verificada.
Abstract
The resistance of triatomines to insecticide was reported in Venezuela, Argentina and Bolivia, being possible the existence of other focus in still more ample regions. In this way, it becomes necessary to realize studies to investigate the state of resistance of these vectors to insecticides, as well as its mechanisms, in order to develop adequate strategies to the local necessities, or even to prevent the emergence of this phenomenon. The objective of this study was standardized biological assays for monitoring the triatomines resistance to insecticide in laboratory, and to monitor the susceptibility of fourteen populations of Triatoma sordida State (Southeast Brazil) to the pirethroid Deltamethrin The area where the triatomines were collected was submitted to chemical control for about 30 years.The susceptibility reference strain is the Uberaba. The methodology has been guided by the OPS recommendations (2005) and WHO (1994), being redefined some technical details (ideal diagnostic dose for resistance selection of triatomines, ideal place of application of the insecticide of nymphs I, age and generation of used insects). The baseline of the susceptibility of the reference strain was initially determined. Deltamethrin diluted in acetone was applied topically on the back of the abdomen of nymphs I of the F2 generation (five days of age, fasting, 1.0 ± 0.2 mg. of weight) with the aid of a microsyringe. The results of the dose-response tests were analyzed using the program PROBIT (Finney, 1971). After that, the field populations were submitted to the two diagnostic doses (1XDL99 and 2XDL99 of the susceptibility reference strain) . All the populations were less susceptible to the insecticide when compared with the susceptibility reference strain. The resistance rate ranged from 2.6 to 6.8. The comparison of a DNA fragment of 317 pb of the DNA mitochondrial cytochrome b (mtCytB) gene has been used to infer the genetic variability of the fourteen T. sordida populations studied. Phylogenetics inferences, with P. megistus as external group, had not shown the formation of clades. The 150 specimens analyzed showed 50 haplotypes resulting a diversity (Hd) of 0,831. It was possible to distinguish six different genetic populations. Analysis of the Network reveled several loops, demonstrating homoplasia and the occurrence of reverses/parallels mutations. With the genetic marker used it was not possible to establish correlation between the genetic variability of the insects and the resistance to the Deltamethrin. Giordano et al. (2005) suggests that the microsatellites would be a more sensible and efficient tool to define this objective. The possible biochemical nature for the resistance ratios encountered is being verified.
Keywords in Portuguese
Resistência a inseticidasDeltametrina
mtCytB
Variabilidade genética
Triatomíneos
Triatoma sordida
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