Advisor | Ayres, Constância Flávia Junqueira | pt_BR |
Author | Barbosa, Priscilla Paschoal | pt_BR |
Access date | 2016-05-19T13:08:20Z | |
Available date | 2016-05-19T13:08:20Z | |
Document date | 2016 | |
Citation | BARBOSA, Priscilla Paschoal. Otimização da RT-PCR Multiplex para detecção de vírus dengue em amostras de Aedes aegypti infectados artificialmente. 2016. 73 f. Dissertação (Mestrado em Ciências)-Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães, Fundação Oswaldo Cruz, Recife, 2016. | pt_BR |
URI | https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/14345 | |
Abstract in Portuguese | A dengue é a mais importante doença viral transmitida por mosquitos, no que diz respeito à morbidade e mortalidade, que afeta os seres humanos. Este vírus é transmitido pelos vetores Aedes albopictus e Aedes aegypti, este último é o principal vetor nas Américas. O controle da doença se baseia na vigilância laboratorial e vigilância entomológica. A vigilância laboratorial visa aprimorar a capacidade do diagnóstico, detectando precocemente a circulação viral e monitorando os sorotipos circulantes. Dentro deste tipo de vigilância, a RT-PCR é um método bastante usado no diagnóstico da doença em humanos e mosquitos, porém, a má conservação do material pode comprometer a integridade do RNA e trazer resultados falso-negativos. O desenvolvimento de melhores métodos de vigilância do vírus dengue (DENV) em mosquitos é de grande valor para os programas de controle. Desta maneira, o presente projeto visou
otimizar a técnica de RT-PCR Multiplex para detecção de DENV em amostras de Ae. aegypti infectadas artificialmente pelo vírus. Primers que amplificam uma região de 80 pb do gene rpL8 de mosquito foram desenhados no site Primer3 e avaliados na ferramenta online
Multiple Primer Analyzer, junto com primers que amplificam os sorotipos DENV. Não houve competição de primers e foi observado bandas distintas no gel de agarose. Foi avaliado o efeito de diferentes formas de preservação do material genético das amostras (RNAlater®, freezer -80°C e nitrogênio líquido) por 7 dias, onde não houve diferenças significativas em relação à integridade do RNA. O efeito de diferentes formas de extração de RNA (Kit da QIAGEN®, TRIzol® e Chomczymski-Sacchi) também foi avaliado e o método ChomczymskiSacchi obteve o melhor desempenho. A otimização desta técnica permitirá uma maior
confiabilidade nos resultados, já que além da detecção dos sorotipos, haverá uma confirmação da qualidade do RNA, aprimorando a capacidade do diagnóstico e auxiliando a prevenção e controle da transmissão da dengue. | pt_BR |
Language | por | pt_BR |
Publisher | Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães | pt_BR |
Rights | open access | pt_BR |
Subject in Portuguese | Aedes | pt_BR |
Subject in Portuguese | Reação em Cadeia da Polimerase | pt_BR |
Subject in Portuguese | Estabilidade de RNA | pt_BR |
Subject in Portuguese | Vírus da Dengue | pt_BR |
Title | Otimização da RT-PCR Multiplex para detecção de vírus dengue em amostras de Aedes aegypti infectados artificialmente | pt_BR |
Alternative title | Optimization of Multiplex RT-PCR for Dengue virus detection in artificially infected Aedes aegypti samples | en |
Type | Dissertation | en |
Defense date | 2016-02-26 | pt_BR |
Defense Institution | Fundação Oswaldo Cruz.Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. | pt_BR |
Degree level | Mestrado Acadêmico | pt_BR |
Place of Defense | Recife/PE | pt_BR |
Program | Programa de Pós‐Graduação em Biociências e Biotecnologia em Saúde | pt_BR |
Co-Advisor | Guedes, Duschinka Ribeiro Duarte | pt_BR |
Affilliation | Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil. | pt_BR |
Member of the board | Ayres, Constância Flávia Junqueira | pt_BR |
Member of the board | Dhalia, Rafael | pt_BR |
Member of the board | Cordeiro, Marli Tenório | pt_BR |
DeCS | Aedes/virologia | pt_BR |
DeCS | Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real/métodos | pt_BR |
DeCS | Estabilidade de RNA | pt_BR |
DeCS | Vírus da Dengue/genética | pt_BR |
DeCS | Vírus da Dengue/isolamento & purificaçäo | pt_BR |