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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/14336
CARACTERIZAÇÃO DE INTERAÇÕES ENTRE SUBUNIDADES DO COMPLEXO DE INICIAÇÃO DA TRADUÇÃO EIF4F E HOMÓLOGOS DA PROTEÍNA DE LIGAÇÃO AO POLI-A (PABP) DE LEISHMANIA SP
Fator de Iniciação 4F em Eucariotos
Ligação Proteica
Proteínas de Ligação a Poli(A)/genética
Proteínas de Ligação a Poli(A)/metabolismo
Homologia de Sequência do Ácido Nucleico
Subunidades Proteicas/metabolismo
Xavier, Camila Cavalcanti | Date Issued:
2015
Alternative title
Characterization of interactions between the subunits of the translation initiation of the eIF4F complex and homologues of poly A binding protein (PABP) of Leishmania spAuthor
Advisor
Comittee Member
Affilliation
Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil
Abstract in Portuguese
Os tripanossomatídeos são caracterizados por processos moleculares diferenciados como a transcrição policistrônica e regulação pós-transcricional da expressão gênica. Em mamíferos, a tradução se inicia com a ligação do complexo eIF4F (formado pelos eIF4A, eIF4E e eIF4G) a extremidade 5' dos mRNAs, o que facilita seu reconhecimento pelo ribossomo. A atividade do eIF4F é reforçada pela proteína de ligação a cauda poli-A (PABP), na extremidade 3' dos mRNAs, que interage com o eIF4G. Dois complexos do tipo eIF4F foram identificados em tripanossomatídeos: o primeiro formado pelos EIF4G3, EIF4E4 e EIF4AI com a PABP1; e um outro baseado na interação do EIF4G4 com o EIF4E3 e o EIF4A1. Este trabalho buscou caracterizar as interações entre as subunidades destes complexos e sua associação com PABPs de Leishmania, avaliando o efeito de mutações em motivos específicos. Proteínas recombinantes foram geradas fusionadas a GST e avaliadas quanto a sua habilidade de interagir com parceiros marcados radioativamente em ensaios do tipo pull-down. Para o EIF4G3, mutações individuais em dois resíduos vizinhos (I8A e R9A), afetaram a interação com o EIF4E4 e a mutação de ambos os resíduos equivalentes do EIF4G4 (IL25-26AA) também impediu sua ligação ao EIF4E3, sugerindo um motivo comum para a ligação aos seus parceiros. As proteínas EIF4E3 e EIF4E4 foram avaliadas quanto à capacidade de interagir com a PABP2 e PABP1 respectivamente, e mutações em motivos conservados nas regiões N-terminais dos EIF4E (Boxes A, B e C) aboliram sua interação com os homólogos da PABP. Para identificar que regiões da PABP1 estão relacionadas às interações com o parceiro EIF4E4, foram obtidas proteínas PABP1 mutantes em motivos conservados e observou-se que a mutação no motivo TGM, C-terminal, aboliu sua interação com o EIF4E4. Com estas abordagens conseguiu-se avançar na definição das interações entre as referidas subunidades do eIF4F e PABP, identificando-se diferenças relevantes em relação a outros eucariotos
Keywords in Portuguese
Leishmania sp Complexo EIF4F e PABP Interação ProteicaDeCS
LeishmaniaFator de Iniciação 4F em Eucariotos
Ligação Proteica
Proteínas de Ligação a Poli(A)/genética
Proteínas de Ligação a Poli(A)/metabolismo
Homologia de Sequência do Ácido Nucleico
Subunidades Proteicas/metabolismo
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