Biomanguinhos - Dissertações de Mestrado
https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/5493
2024-03-28T13:13:42ZAplicação de novos métodos de controle de qualidade na fabricação da vacina BCG Moreau RDJ do Programa Nacional de Imunizações
https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/62819
Aplicação de novos métodos de controle de qualidade na fabricação da vacina BCG Moreau RDJ do Programa Nacional de Imunizações
Silva, Wellington Seguins da
O agente etiológico da tuberculose é o M. tuberculosis, um patógeno intracelular, sendo uma das principais causadoras de mortes no mundo por um único agente infeccioso. A vacina BCG é constituída por uma cepa viva atenuada do M. bovis, amplamente utilizada para a prevenção da tuberculose (TB) e como agente imunoterápico contra o câncer superficial de bexiga. A Farmacopeia Brasileira e a OMS recomendam a técnica de contagem de unidades formadoras de colônias (UFC) para a determinação da viabilidade, termoestabilidade e ensaios de potência da vacina BCG. Essa técnica é lenta, apresentando baixa reprodutibilidade e alta variabilidade nos resultados dos testes. A OMS tem realizado desde 1999, revisões dos requerimentos de qualidade da vacina BCG em uso visando a atualização das metodologias e padrões usados no controle. Dentre esses métodos encontra-se o ensaio de bioluminescência, ATP modificado, que pode ser utilizado para determinar o número de organismos viáveis nas vacinas liofilizadas e congeladas, incluindo novas cepas recombinantes. Outra recomendação para o controle de qualidade da vacina BCG baseia-se na confirmação da identidade do produto, nas características genéticas e morfológicas, na observação dos bacilos corados pelo método de Ziehl-Neelsen e na determinação das características das colônias crescidas em meio sólido. Estes métodos não permitem discriminar as diversas subcepas de BCG, assim como diferenciá-las de outros membros do complexo M. tuberculosis. O uso de técnicas empregando ácidos nucléicos foi introduzido como método alternativo de controle de qualidade para as subcepas de BCG na fabricação da vacina por ser específico, rápido, reprodutível, robusto e de baixo custo. O objeto do presente estudo, a atualização do controle de qualidade da vacina BCG Moreau RDJ, por meio da identificação genômica por PCR multiplex (PCRm) e avaliação da viabilidade por bioluminescência, de acordo com as novas normas preconizadas pela OMS possibilitou a avaliação de 10 lotes para determinar a relação de ATP pelo UFC. Nossos resultados indicaram que a quantidade de ATP produzido estava diretamente relacionada a quantidade de bacilos viáveis na cultura, mostrando uma correlação forte e positiva (r = 0,872961). A avaliação da identidade da vacina BCG Moreau RDJ foi realizada após uma padronização da extração do DNA genômico e amplificação por PCRm de cinco alvos genéticos e os resultados mostraram que a técnica é reprodutível e capaz de amplificar os fragmentos esperados RD2(315 pb), RD8(472 pb), senX3-regX3(276 pb), RD15(252 pb) e RD1(196 pb) em 9 dos 10 lotes testados, com a manutenção da identidade nos diferentes lotes. O presente trabalho faz parte de um estudo multicêntrico internacional coordenado pela OMS em andamento desde 2004, que visa à uniformização de novas metodologias de Controle de Qualidade cuja normatização deverá ocorrer após a análise dos resultados por comitês da OMS e, consequentemente, a melhoria das vacinas BCGs e de outras contra a TB, em desenvolvimento, que tenham como matriz micobactérias.
2013-01-01T00:00:00ZValidação dos processos envolvidos na obtenção do polissacarídeo capsular de Haemophilus influenzae tipo b conjugado com toxóide tetânico utilizado para produção de vacina
https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/62658
Validação dos processos envolvidos na obtenção do polissacarídeo capsular de Haemophilus influenzae tipo b conjugado com toxóide tetânico utilizado para produção de vacina
Barreira, Aline Louzada Santos
Haemophilus influenzae tipo b (Hib) é a principal causa de pneumonia bacteriana e meningite em crianças com menos de 5 anos de idade. A doença pode ser prevenida através da vacinação com uma vacina conjugada polissacarídeo-proteína, uma vez que a vacina de polissacarídeo não é eficaz. Desde 1999, o Ministério da Saúde incluiu a vacina conjugada Hib na rotina do calendário de imunização para crianças rotineiramente. Sendo este um processo de grande importância para as pessoas e demanda de produção significativa para o governo brasileiro, é necessário que os processos estejam de acordo com as normas nacionais e internacionais de regulamentação e devem ser validados. Uma operação validada assegura a produção de lotes uniformes que atendem as especificações exigidas, consequentemente, garantindo ao fabricante a capacidade de proporcionar um produto de qualidade. O trabalho propõe o desenvolvimento de uma metodologia que evidencie e garanta o processo de produção de um conjugado de polissacarídeo-proteína pelo método de conjugação química e que será produzido de forma consistente e de acordo com as suas especificações pré-definidas. Os atributos de qualidade garantem o não desabastecimento da vacina Haemophilus influenzae tipo b por desvios de processo, o que contribui com aumento do valor agregado ao produto em questão. Portanto, a metodologia de validação foi aplicada ao estudo de validação. O estudo baseou-se em três etapas. A primeira foi baseada em análise de parâmetros do processo de conjugação química para mapear e estabelecer intervalos críticos de controle quanto a estes parâmetros, a segunda fase foi realizada com a produção de três lotes consecutivos, em escala industrial, com monitorização regular dos parâmetros críticos mapeados anteriormente. A fase final consistiu em amostras recolhidas, em tempo pré-determinado, durante o processo de produção e de controle do produto final em tamanho 50% a mais que na rotina de produção. Estas amostras foram analisadas utilizando os métodos de análise que foram anteriormente validados, a fim de garantir a reprodutibilidade dos resultados. A robustez do processo foi assegurada uma vez que todos os parâmetros do processo avaliados apresentaram resultados dentro do padrão de conformidade com os resultados de controle determinados durante o processo, e no produto final para a população de amostragem dentro de especificações definidas pelas metodologias analíticas validadas garantindo os resultados. O trabalho proposto assegura status de processo validado para o conjugado polissacarídeo-proteína com excepcionais rendimentos obtidos, combinado com características químicas bem definidas.
2013-01-01T00:00:00ZAvaliação do impacto da leptospirose no desempenho atlético de equinos da raça puro sangue inglês
https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/62641
Avaliação do impacto da leptospirose no desempenho atlético de equinos da raça puro sangue inglês
Motta, Camila Hamond Regua
Embora os sintomas mais freqüentemente descritos na leptospirose em equinos sejam febre, icterícia, nefrite e complicações oculares, pouco se estuda sobre a interferência desta infecção no desempenho atlético destes animais. O objetivo deste estudo foi avaliar a associação da sororeatividade para leptospirose com a ocorrência de hemorragia pulmonar induzida por exercício (HPIE) e com o desempenho atlético em equinos. Estudou-se 180 equinos adultos mantidos em treinamento no Jockey Clube Brasileiro do Rio de Janeiro para detecção de anticorpos anti-Leptospira pela técnica da soroaglutinação microscópica. Noventa (50,0%) animais se mostraram sororreativos com títulos = 200, com predomínio do sorotipo Copenhageni (87,8%). Os 79 animais sororreativos para Copenhageni foram avaliados por endoscopia das vias aéreas superiores 30 minutos após o exercício. Destes, 32 (40,5%) apresentavam histórico de dificuldade em ganhar peso, 24 (30,4%) inapetência e queda de desempenho atlético. Ao exame clínico, sete (7,8%) apresentaram icterícia, 18 (20,0%) lacrimejamento e hiperemia ótica, 24 (30,4%) encontravam-se apáticos, dois (2,5%) com mialgia, quatro (4,4%) com letargia e 33 (41,8%) com opacidade de pêlo. Na endoscopia das vias aéreas superiores 16 (20,2%) dos animais sororreativos apresentaram HPIE, assim como 10 (11,1%) dos equinos soronegativos para leptospirose. Dos 79 animais sororreativos para o serovar Copenhageni, 37 (41,1%) foram tratados com penicilina procainada associada à estreptomicina, e 15 dias após o tratamento verificou-se melhora significativa com relação à dificuldade em ganhar peso, inapetência, apatia e letargia. Já no que se refere à melhora do desempenho atlético e opacidade de pelo, as melhoras foram evidentes 45 dias após o tratamento. Sete destes animais apresentavam HPIE ao primeiro exame, e reverteram de grau 4 para 3 (dois animais) ou 2 (cinco animais). Verificou-se, portanto, associação entre sororreatividade para leptospirose com o desempenho atlético destes animais, principalmente no que diz respeito à severidade da HPIE, e que o tratamento específico foi capaz de reverter tal quadro.
2010-01-01T00:00:00ZPapel do fator de transcrição NFAT1 na regulação da resposta alérgica asmática
https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/62631
Papel do fator de transcrição NFAT1 na regulação da resposta alérgica asmática
Fonseca, Bruna de Paula Fonseca e
Apesar da hiper-reatividade brônquica ser uma característica marcante da asma, os mecanismos moleculares que a determinam ainda não estão completamente estabelecidos. Os principais receptores envolvidos no processo de broncoconstrição são os receptores muscarínicos. Esses receptores são ativados por acetilcolina e geram um influxo de Ca2+ intracelular que ativa os fatores de transcrição da família NFAT. Animais deficientes para NFAT1 (NFAT1-/-) diferenciam-se preferencialmente para um fenótipo Th2 e apresentam uma resposta alérgica pleural exacerbada quando comparados aos animais NFAT1+/+. Para estudar o papel do NFAT1 na patologia da asma alérgica e sua influência na hiper-reatividade brônquica, submetemos camundongos NFAT1+/+ e NFAT1-/- a um modelo experimental de asma. Nestas condições, os camundongos NFAT1-/- apresentaram resposta inflamatória eosinofílica exacerbada, altos níveis de IgE sérica, níveis aumentados de eotaxina, intenso infiltrado inflamatório e maior deposição de fibras colágenas no tecido pulmonar quando comparados com os animais NFAT1+/+. Apesar disso, a provocação alergênica nos camundongos NFAT1-/, ao contrário do observado nos camundongos selvagens, não produziu hiperreatividade, já que os camundongos NFAT1-/- foram claramente refratários ao broncoespasmo induzido pelo aerosol de metacolina. Experimentos com camundongos “naive” demonstraram que essa inibição ocorre de maneira intrínseca e independente do processo de sensibilização. Além disso, essa inibição é específica para a via colinérgica, já que camundongos NFAT1-/- expostos a serotonina apresentaram taxas de hiper-reatividade claramente maiores comparadas às dos camundongos NFAT1+/+. Esses resultados, em conjunto, mostram que o NFAT1 é extremamente importante na regulação da resposta alérgica asmática e essencial para a broncoconstrição induzida especificamente pela via colinérgica.
2007-01-01T00:00:00Z